← Aktuální text · Historie

Vyhláška, kterou se stanoví hygienické požadavky na pitnou a teplou vodu a četnost a rozsah kontroly pitné vody

Aktuální text a fecha 2006-06-18
§ 1

Předmět úpravy

Touto vyhláškou se v souladu s právem Evropských společenství^1) stanoví hygienické limity mikrobiologických, biologických, fyzikálních, chemických a organoleptických ukazatelů jakosti pitné vody^2) včetně pitné vody balené^3) a teplé vody dodávané potrubím užitkové vody nebo vnitřním vodovodem, které jsou konstrukčně propojeny směšovací baterií s vodovodním potrubím pitné vody (dále jen „teplá voda“), jakož i vody teplé vyráběné z individuálního zdroje pro účely osobní hygieny zaměstnanců. Vyhláška dále stanoví rozsah a četnost kontroly dodržení jakosti pitné vody a požadavky na metody kontroly jakosti pitné vody.

§ 2

Vymezení pojmů

Pro účely této vyhlášky se rozumí

§ 3

Ukazatele jakosti pitné a teplé vody a jejich hygienické limity

(1) Pitná voda musí mít takové fyzikálně-chemické vlastnosti, které nepředstavují ohrožení veřejného zdraví. Pitná a teplá voda nesmí obsahovat mikroorganismy, parazity a látky jakéhokoliv druhu v počtu nebo koncentraci, které by mohly ohrozit veřejné zdraví. Ukazatele jakosti pitné vody a jejich hygienické limity jsou uvedeny v příloze č. 1. Radiologické ukazatele pitné vody a jejich limity stanoví zvláštní právní předpis.^6)

(2) Ukazatele jakosti teplé vody podle § 3 odst. 3 věty první a druhé zákona a jejich hygienické limity jsou uvedeny v příloze č. 2.

(3) Ukazatele jakosti teplé vody podle § 41a odst. 1 zákona a jejich hygienické limity jsou uvedeny v příloze č. 3.

Kontrola pitné vody

§ 4

(1) Minimální roční četnost odběrů a rozborů vzorků pitné vody pro provádění kontroly, zda voda má jakost pitné vody, stanoví příloha č. 4. Je-li pitná voda dodávána jen po část roku (sezonně), četnost rozborů se úměrně krátí, nesmí však být menší, než uvádí nejnižší kategorie přílohy č. 4. Minimální rozsah kontrolních rozborů vzorků pitné vody stanoví příloha č. 5.

(2) Mimo četnost uvedenou v odstavci 1 se odběry a rozbory vzorků pitné vody provádějí

(3) Rozbor podle odstavce 2 se provádí v rozsahu kráceného rozboru podle přílohy č. 5 rozšířeného o ukazatele, jejichž obsah může být zvýšen vlivem uvedených změn v režimu zásobování pitnou vodou.

(4) Před uvedením nového zdroje pitné vody do provozu musí být proveden úplný rozbor upravené pitné vody v rozsahu přílohy č. 5. Výsledky rozboru nesmějí být starší než 6 měsíců.

(5) Kontrola vody používané v dopravních prostředcích se provádí v rozsahu kráceného rozboru, popřípadě rozšířeného o ukazatele, jejichž hodnota může být změněna vlivem materiálů, se kterými přichází voda do styku, nebo dodatečnou úpravou vody, za podmínky, že voda je odebírána z vodovodu, kde kvalita vody vyhovuje požadavkům této vyhlášky.

§ 5

(1) Vzorky pitné vody se pro kontrolu odebírají tak, aby byly reprezentativní pro jakost pitné vody spotřebovávané během celého roku a pro celou vodovodní síť. Počet míst odběru musí být roven nejméně počtu krácených rozborů podle přílohy č. 4, u vodovodů zásobujících více než 5000 obyvatel musí být počet míst odběru roven nejméně 80 % počtu krácených rozborů podle přílohy č. 4.

(2) Místa odběru vzorků musí být volena tak, aby více než 50 % míst odběru nebylo trvalých, ale měnilo se každý rok. Měnící se místa odběru se vybírají metodou náhodného výběru nebo jinou vhodnou metodou, která zaručí, že žádný ze zásobovaných objektů nebude vyloučen z možnosti kontroly.

(3) Odběr vzorků pitné vody se provádí v místech, kde mají být splněny požadavky na jakost vody (§ 8). Jedná-li se o ukazatele antimon, arsen, benzen, beryllium, bor, bromičnany, dusičnany, fluoridy, chloridy, kyanidy, mikrocystin LR, ozon, pesticidní látky, rtuť, selen a sírany, u nichž se nepředpokládá, že by se jejich koncentrace mohla během distribuce mezi úpravnou a místem spotřeby zvyšovat, mohou být vzorky pitné vody odebírány buď na výstupu z úpravny nebo na vhodných místech vodovodní sítě, například na vodojemu, pokud tím prokazatelně nevznikají změny u naměřené hodnoty daného ukazatele.

§ 6

Četnost a rozsah rozborů u výdejních automatů

(1) Před uvedením do provozu se u nového výdejního automatu provede úplný rozbor pitné vody. V průběhu prvního roku provozu se provádí jednou měsíčně mikrobiologický rozbor v rozsahu kráceného rozboru a jednou za 6 měsíců biologický, chemický, fyzikální a organoleptický rozbor v rozsahu kráceného rozboru rozšířeného o ukazatele olovo, chrom, nikl a zinek. Pro zinek se stanoví nejvyšší mezní hodnota 3 mg/l. V případě výsledků vyhovujících hygienickým limitům během prvního roku provozu se od druhého roku provozu provádí jednou za rok biologický, chemický, fyzikální a organoleptický rozbor v rozsahu kráceného rozboru a jednou za 2 měsíce též mikrobiologický rozbor v rozsahu kráceného rozboru.

(2) Zdroj vody, z něhož se voda do automatů dováží nebo přivádí, se kontroluje v četnosti uvedené v tabulce A přílohy č. 4 podle objemu vyráběné vody, minimálně však v rozsahu 12 krácených rozborů rozšířených o ukazatel enterokoky, a 2 úplných rozborů za rok.

§ 7

Požadavky na odběr vzorků a metody rozboru

(1) Nestanoví-li tato vyhláška jinak, postupuje se při odběru vzorku pitné nebo teplé vody podle metod obsažených v českých technických normách.^8)

(2) Pro rozbor vzorku mikrobiologických a biologických ukazatelů pitné a teplé vody uvedené v oddílu A příloh č. 1 až 3 jsou stanoveny metody uvedené v oddílu A přílohy č. 6. Pro stanovení hodnot fyzikálních a chemických ukazatelů pitné a teplé vody uvedených v oddílu B příloh příloh č. 1 až 3 je možné použít jakékoliv analytické metody splňující požadavky stanovené v oddílu B přílohy č. 6.

§ 8

Místa splnění požadavků na jakost pitné a teplé vody

(1) Hygienické limity ukazatelů jakosti pitné vody musí být dodrženy

(2) Hygienické limity ukazatelů teplé vody musí být dodrženy na všech místech uvnitř stavby nebo na pozemku, kde teplá voda vytéká z kohoutku nebo ze sprchy.

§ 9

Opakované rozbory

(1) Je-li výsledek stanovení hodnot chemických a fyzikálních ukazatelů s mezní hodnotou a nejvyšší mezní hodnotou nebo mikrobiologických a biologických ukazatelů s mezní hodnotou vyšší než hygienický limit, odběr vzorku vody a stanovení hodnot ukazatelů, u nichž došlo k překročení limitu, se neprodleně opakuje pro potvrzení nedodržení hygienických limitů, popřípadě pro ověření účinnosti provedených nápravných opatření. V případě nevýznamného překročení limitních hodnot nápravná opatření podle § 4 odst. 5 zákona mohou být prováděna nejpozději po potvrzení nedodržení hygienických limitů.

(2) Je-li výsledek stanovení hodnot mikrobiologických a biologických ukazatelů s nejvyšší mezní hodnotou vyšší než hygienický limit, jsou neprodleně činěna nápravná opatření podle § 4 odst. 5 zákona a odběr vzorku vody a stanovení hodnot ukazatelů, u nichž došlo k překročení hygienického limitu, se opakuje pro potvrzení účinnosti provedených nápravných opatření.

§ 10

Náležitosti žádostí, návrhů a oznámení

(1) Žádost podle § 3 odst. 4 a 5 zákona obsahuje

(2) Návrh podle § 4 odst. 4 zákona obsahuje

(3) Oznámení podle § 4 odst. 6 zákona obsahuje

§ 11

(1) Pro snížení četnosti kontroly podle § 4 odst. 4 zákona se za vyhovující výsledky fyzikálních, chemických a organoleptických ukazatelů ve smyslu § 10 odst. 2 písm. d) považují stálé hodnoty bez abnormálních změn s nálezy nižšími než 50 % hygienického limitu. To neplatí, jde-li o ukazatele barva, konduktivita a pH, kde musí být hodnoty stálé (u pH v rozmezí 1 jednotky), a ukazatele chuť a pach, které musí být vždy pro spotřebitele přijatelné a ukazatele fluoridy a sírany, u kterých se za vyhovující výsledky považují stálé hodnoty bez abnormálních změn s nálezy nižšími než 75 % hygienického limitu. V případě mikrobiologických a biologických ukazatelů se za vyhovující výsledky u počtu kolonií při 22 °C, počtu kolonií při 36 °C a mikroskopického obrazu považují stálé hodnoty bez abnormálních změn nepřevyšující hygienický limit. U ukazatele koliformní bakterie se připouští nejméně 95 % výsledků s nulovými hodnotami a ve zbývajících případech nejvyšší hodnota 5 KTJ/100 ml, v případě předložení řady méně než 20 výsledků je přípustný pouze 1 výsledek s nenulovou hodnotou, která nepřesáhne 5 KTJ/100 ml.

(2) Při stanovení nižšího počtu vzorků pro vybrané ukazatele úplného rozboru se za vyhovující výsledky považují stálé hodnoty bez abnormálních změn s nálezy nižšími než 50 % hygienického limitu u ukazatelů s mezní hodnotou, a s nálezy nižšími než 30 % hygienického limitu u ukazatelů s nejvyšší mezní hodnotou.

Přechodná a závěrečná ustanovení

§ 12

(1) Ode dne nabytí účinnosti vyhlášky do 31. prosince 2007 musí být místa odběru vzorků volena tak, aby více než 25 % míst odběru nebylo trvalých, ale měnilo se každý rok. Měnící se místa odběru se vybírají metodou náhodného výběru nebo jinou vhodnou metodou, která zajistí, že žádný ze zásobovaných objektů nebude vyloučen z možnosti kontroly.

(2) Pro ukazatel „bromičnany“ platí hygienický limit 25 μg/l (nejvyšší mezní hodnota) do 24. prosince 2008, pro ukazatel „chloritany“ platí hygienický limit 400 μg/l (mezní hodnota) do 24. prosince 2006, pro ukazatel „olovo“ platí hygienický limit 25 μg/l (nejvyšší mezní hodnota) do 24. prosince 2013. Pro balenou pitnou vodu a pitnou vodu dodávanou z výdejních automatů platí hygienické limity uvedené v příloze č. 1 od nabytí účinnosti vyhlášky.

§ 13

Zrušuje se vyhláška č. 376/2000 Sb., kterou se stanoví požadavky na pitnou vodu a rozsah a četnost její kontroly.

§ 14

Účinnost

Tato vyhláška nabývá účinnosti dnem 1. května 2004.

Ministr:

MUDr. Kubinyi, Ph.D. v. r.

Příloha č. 1 k vyhlášce č. 252/2004 Sb.

Mikrobiologické, biologické, fyzikální, chemické a organoleptické ukazatele pitné vody a jejich hygienické limity

A. Mikrobiologické a biologické ukazatele

č. ukazatel jednotka limit typ limitu Vysvětlivky
1 Clostridium perfringens KTJ/100 ml 0 MH 1
2 enterokoky KTJ/100 ml 0 NMH
KTJ/250 ml 0 NMH 2
3 Escherichia coli KTJ/100 ml 0 NMH
KTJ/250 ml 0 NMH 2
4 koliformní bakterie KTJ/100 ml 0 MH
5 mikroskopický obraz – abioseston % 10 MH 3
6 mikroskopický obraz – počet organismů jedinci/ml 50 MH 3,4
7 mikroskopický obraz – živé organismy jedinci/ml 0 MH 3, 4, 5
8 počty kolonií při 22 °C KTJ/ml 200 MH 6
KTJ/ml 100 NMH 2
9 počty kolonií při 36 °C KTJ/ml 20 MH 7
KTJ/ml 20 NMH 2
10 Pseudomonas aeruginosa KTJ/250 ml 0 NMH 2

B. Fyzikální, chemické a organoleptické ukazatele

č. ukazatel symbol jednotka limit typ limitu vysvětlivky
11 1,2-dichlorethan µg/l 3,0 NMH
12 akrylamid µg/l 0,1 NMH 8
13 amonné ionty NH4+ mg/l 0,50 MH
14 antimon Sb µg/l 5,0 NMH
15 arsen As µg/l 10 NMH
16 barva mg/l Pt 20 MH
17 benzen µg/l 1,0 NMH 9
18 benzo[α]pyren BaP µg/l 0,010 NMH
19 beryllium Be µg/l 2,0 NMH 10
20 bor B mg/l 1,0 NMH
21 bromičnany BrO3 µg/l 10 NMH 11, 35
22 celkový organický uhlík TOC mg/l 5,0 MH 12
23 dusičnany N03- mg/l 50 NMH 13
24 dusitany N02- mg/l 0,50 NMH 13
25 epichlorhydrin µg/l 0,10 NMH 8
26 fluoridy F mg/l 1,5 NMH
27 hliník Al mg/l 0,20 MH
28 hořčík Mg mg/l 10 MH 14
20 – 30 DH 15
29 chemická spotřeba kyslíku (manganistanem) CHSK-Mn mg/l 3,0 MH 16
30 chlor volný mg/l 0,30 MH 17
31 chlorethen (vinylchlorid) µg/l 0,50 NMH 8
32 chloridy cr mg/l 100 MH 18, 19
33 chloritany C102- µg/l 200 MH 11, 17, 35
34 chrom Cr µg/l 50 NMH
35 chuť přijatelná pro odběratele MH 20
36 kadmium Cd µg/l 5,0 NMH
37 konduktivita K mS/m 125 MH 19, 21
38 kyanidy celkové CN- mg/l 0,050 NMH
39 mangan Mn mg/l 0,050 MH 22
40 měď Cu µg/l 1000 NMH 23
41 microcystin-LR µg/l 1 NMH 24
42 nikl Ni µg/l 20 NMH 25
43 olovo Pb µg/l 10 NMH 25, 35
44 ozon O3 µg/l 50 MH 17
45 pach přijatelný pro odběratele MH 20
46 pesticidní látky µg/l 0,10 NMH 26
47 pesticidní látky celkem µg/l 0,50 NMH 27
48 PH pH 6,5 - 9,5 MH 19, 29
49 polycyklické aromatické uhlovodíky PAU µg/l 0,10 NMH 28
50 rtuť Hg µg/l 1,0 NMH
51 selen Se µg/l 10 NMH
52 sírany SO042- mg/l 250 MH 19
53 sodík Na mg/l 200 MH
54 stříbro Ag µg/l 50 NMH 30
55 tetrachlorethen PCE µg/l 10 NMH 31
56 trihalomethany THM µg/l 100 NMH 32
57 trichlorethen TCE µg/l 10 NMH 31
58 trichlormethan (chloroform) µg/l 30 MH
59 vápník Ca mg/l 30 MH 14
40-80 DH 15
60 vápník a hořčík Ca + Mg mmol/l 2 – 3,5 DH 15
61 zákal ZF(t,n) 5 MH 33
62 železo Fe mg/l 0,20 MH 34

Použité zkratky:

KTJ – kolonie tvořící jednotka

NMH – nejvyšší mezní hodnota

MH – mezní hodnota

DH – doporučená hodnota (§ 3 odst. 1 zákona č. 258/2000 Sb., ve znění zákona č. 274/2003 Sb.)

Vysvětlivky k tabulkám:

Příloha č. 2 k vyhlášce č. 252/2004 Sb.

Mikrobiologické, biologické, fyzikální, chemické a organoleptické ukazatele teplé vody podle § 3 odst. 3 zákona a jejich hygienické limity

| č. | ukazatel | symbol | jednotka | limit | typ limitu | vysvětlivky | | | teplá voda vyrobená z pitné vody | teplá voda vyrobená z jiné vody než z vody pitné | | | | | | | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | 1 | Legionella pneumophila | | KTJ/100 ml | 100 | 100 | MH | 1, 2 | | 2 | Legionella pneumophila | | KTJ/100 ml | 0 | 0 | NMH | 1, 3 | | 3 | počty kolonií při 36 °C | | KTJ/ml | 200 | 200 | MH | 1 | | 4 | Escherichia coli | | KTJ/100 ml | – | 0 | NMH | 1 | | 5 | Pseudomonas aeruginosa | | KTJ/100 ml | – | 0 | MH | 1 | | 6 | atypická mykobakteria | | KTJ/1000 ml | – | 100 | MH | 1, 4 | | 7 | barva | | mg/l Pt | 20 | – | MH | 1 | | 8 | celkový organický uhlík | TOC | mg/l | 5,0 | 5,0 | MH | 1, 5 | | 9 | chemická spotřeba kyslíku (manganistanem) | CHSK-Mn | mg/l | 3,0 | 5,0 | MH | 1, 6 | | 10 | chlor volný | | mg/l | 1,0 | 1,0 | MH | 1, 7 | | 11 | fosforečnany | | mg/l | 3,5 | 3,5 | MH | 1, 8 | | 12 | oxid chloričitý | | mg/l | 0,8 | 0,8 | MH | 1, 7 | | 13 | pach | | | přijatelný pro odběratele | přijatelný pro odběratele | MH | 1, 9 | | 14 | pH | pH | | 6,5 - 9,5 | 6,0 - 9,5 | MH | 1, 10 | | 15 | teplota | | °C | 55 | 55 | DH | 1, 11 | | 16 | trihalomethany | THM | μg/l | 100 | 100 | NMH | 1, 12 | | 17 | zákal | | ZF(t,n) | 5 | 5 | MH | 1, 13 |

Vysvětlivky:

Příloha č. 3 k vyhlášce č. 252/2004 Sb.

Mikrobiologické, biologické, fyzikální, chemické a organoleptické ukazatele teplé vody vyráběné z individuálního zdroje pro účely osobní hygieny zaměstnanců a jejich hygienické limity

A. Mikrobiologické požadavky

Ukazatel Jednotka Limit Vysvětlivky
atypická mykobakteria KTJ/1000 ml 100 1,3
Escherichia coli KTJ/100 ml 0
legionely KTJ/100 ml 100 2,3
počet kolonií při 36 °C KTJ/1 ml 200
Pseudomonas aeruginosa KTJ/100 ml 0
Staphylococcus aureus KTJ/100 ml 0

B. Fyzikální a chemické požadavky

Ukazatel Jednotka Limit Vysvětlivky
chemická spotřeba kyslíku (manganistanem) mg/l 5,0
pach přijatelný pro odběratele 4
pH 6 – 9,5
trihalometany μg/l 100
volný chlor mg/l 0,1 – 1,0 5
vizuální posouzení 6
zákal ZF(t,n) 5 7

Vysvětlivky:

Příloha č. 4 k vyhlášce č. 252/2004 Sb.

A. Minimální roční četnost odběru a rozsah rozborů vzorků pitné vody (mimo balené vody)

Počet obyvatel zásobované oblasti (§ 2 písm. d)) při denní spotřebě 200 l na osobu Objem vody rozváděné či produkované v zásobované oblasti (m3/den) *) Roční počet vzorku pro krácený rozbor **) Roční počet vzorku pro úplný rozbor **)
≤ 50 ≤ 10 1 1 za dva roky
> 50 ≤ 100 > 10 ≤ 20 2 1
>100 ≤ 500 >20 ≤ 100 3 1
> 500 ≤ 5 000 > 100 ≤ 1 000 4 2
> 5 000 ≤ 50 000 > 1 000 ≤ 10 000 4 + 3 na každých 1 000 m3/den (včetně nedokončených) z celkového objemu 1 + 1 na každých 3 300 m3/den (včetně nedokončených) z celkového objemu
> 50 000 ≤ 500 000 > 10 000 ≤ 100 000 3 + 1 na každých 10 000 m3/den (včetně nedokončených) z celkového objemu
> 500 000 > 100 000 10 + 1 na každých 25 000 m3/den (včetně nedokončených) z celkového objemu

Vysvětlivky k tabulce:

*) Neodpovídá-li objem vyráběné vody počtu obyvatel podle hodnot uvedených v tabulce, považuje se za rozhodující počet zásobovaných obyvatel. Pokud počet zásobovaných obyvatel, např. vzhledem k sezonní rekreaci, výrazně kolísá a nelze jej jednoznačně určit, bere se jako základ stanovení četnosti průměrný objem vyrobené vody (m^3/den) za roční období.

**) Příklad výpočtu: pro objem rozváděné vody 5200 m^3/den je počet krácených rozborů 22 [4 + (6 x 3)] a počet úplných rozborů 3 [1 + (2 x 1)].

B. Minimální roční četnost odběru a rozsah rozborů vzorků balené pitné vody stáčené do láhví nebo kontejnerů za účelem jejího prodeje

Objem vody denně vyráběné pro prodej v láhvích nebo kontejnerech v m3 Roční počet vzorků pro krácený rozbor Roční počet vzorků pro úplný rozbor
< 10 12 1
> 10 ≤ 60 24 1
> 60 2 na každých 5 m3 (včetně nedokončených) z celkového objemu 1 na každých 100 m3 (včetně nedokončených) z celkového objemu

Objemy se počítají jako průměrné hodnoty za kalendářní rok.

Příloha č. 5 k vyhlášce č. 252/2004 Sb.

Minimální rozsah rozborů vzorků pitné vody

Účelem krácených rozborů je získávat pravidelné informace o stabilitě vodního zdroje a účinnosti úpravy vody, zvláště dezinfekce (pokud je prováděna), mikrobiologické jakosti a organoleptických vlastnostech vody, a to za účelem zjištění, zda jsou dodržovány limitní hodnoty stanovené touto vyhláškou nebo orgánem ochrany veřejného zdraví na základě zákona.

Krácený rozbor sestává minimálně z následujících ukazatelů:

č. ukazatel vysvětlivky
1 Escherichia coli
2 koliformní bakterie
3 Clostridium perfringens 1
4 počty kolonií při 22 °C
5 počty kolonií při 36 °C
6 Pseudomonas aeruginosa 2
7 mikroskopický obraz – abioseston 3
8 mikroskopický obraz – počet organismů 3
9 mikroskopický obraz – živé organismy 3
10 amonné ionty
11 barva
12 dusičnany
13 dusitany
14 hliník 4
15 chlor volný 5
16 chemická spotřeba kyslíku - manganistanem (nebo celkový organický uhlík)
17 chuť
18 konduktivita
19 mangan 6
20 pach
21 pH
22 zákal
23 železo

Vysvětlivky k tabulce:

Účelem úplných rozborů je získávat informace potřebné ke zjištění, zda limitní hodnoty všech ukazatelů stanovených touto vyhláškou nebo na základě § 4 odst. 6 zákona č. 258/2000 Sb., ve znění zákona č. 274/2003 Sb. orgánem ochrany veřejného zdraví jsou dodržovány.

Předmětem úplného rozboru jsou všechny ukazatele uvedené v příloze č. 1 (s přihlédnutím k poznámkám k těmto ukazatelům uvedeným v téže příloze) s výjimkou případů, kdy je orgánem ochrany veřejného zdraví stanoveno na základě zákona jinak.

Příloha č. 6 k vyhlášce č. 252/2004 Sb.

Požadavky na analytické metody

A. Ukazatele, pro které jsou stanoveny metody rozboru

Ukazatel Metoda Alternativní metoda
Escherichia coli ČSN EN ISO 9308-1 Detekce Escherichia coli (E. coli) a koliformů pomocí metody Colilert®-18/Quanti-Tray® *)
koliformní bakterie ČSN EN ISO 9308-1
enterokoky ČSN EN ISO 7899-2
Pseudomonas aeruginosa ČSN EN 12780
počty kolonií při 22 °C a 36 °C ČSN EN ISO 6222
mikroskopický obraz ČSN 757711 a ČSN 757713
Clostridium perfringens (včetně spor) viz postup níže
atypická mykobakteria viz postup níže
legionely ČSN ISO 11731

*) čísla patentů v USA: 5.610.029 ze dne 11. března 1997; 5.518.892 ze dne 21. května 1996; 5.620.895 ze dne 15. dubna 1997; 5.753.456 ze dne 19. května 1998

Postup stanovení :

Membránová filtrace, po které následuje anaerobní kultivace membrány na m-CP agaru při 44 ± 1 °C po dobu 21 ± 3 hod. Počítá se četnost neprůsvitných žlutých kolonií, jejichž zbarvení přejde do růžova nebo červena po vystavení parám amoniaku po dobu 20 až 30 sekund.

Agar m-CP má toto složení:

Bazální médium:
tryptóza 30 g
kvasnicový extrakt 20 g
sacharóza 5 g
hydrochlorid L-cysteinu 1 g
MgSO4 . 7 H2O 0,1 g
bromkrezolová purpurová červeň 40 mg
agar 15 g
voda 1000 ml

Tyto součásti bazálního média se rozpustí, pH se upraví na 7,6 a médium se na dobu 15 minut umístí v autoklávu při 121 °C. Poté se médium nechá zchladnout a přidají se následující přísady:

D- cycloserin 400 mg
polymyxin B ve formě síranu 25 mg
indoxyl-β-D-glukosid (předem rozpuštěný v 8 ml sterilní vody) 60 mg
sterilně zfiltrovaný 0,5% fenolftalein difosforečnanový roztok 20 ml
sterilně zfiltrovaný 4,5% FeC13.6 H20 2 ml

Pro stanovení atypických mykobakterií lze použít jednu z následujících metod:

Postup stanovení:

Membránovou filtrací (filtr o porozitě 0,45 μm) se zpracuje s pomocí vodní vývěvy 0,5 l vody. Za sterilních podmínek se filtr vyjme pinzetou a nůžkami rozstříhá na 6 – 8 proužků, které se přemístí do centrifugační nádobky s 20 ml sterilní destilované vody a vytřepou 10 minut na třepačce. Roztok se pak přelije do další nádobky a centrifuguje 20 minut při 2000 g až 3000 g. Supernatant se odlije a sediment se dekontaminuje 3 ml roztoku 3% laurylsulfátu sodného s 1 % NaOH. Po 20 minutách třepání na třepačce se přidá 25 ml sterilní destilované vody a centrifuguje se opět při 2000 g až 3000 g po dobu 20 minut. Po odlití supernatantu se k sedimentu přidají cca 2 ml fyziologického roztoku tak, aby se výsledný objem vzorku ve zkumavce zarovnal na určitou jeho hodnotu, která poslouží pro výpočet kvantity. Po homogenizaci pipetou se vzorek očkuje v množství po 0,25 ml na šest vaječných půd (3 Löwensteinovy-Jensenovy a 3 Ogawovy půdy). Vždy dvě z naočkovaných půd se (1 L.-J. a 1 Ogawova) se inkubují při 30 °C, 37 °C a 42 °C. Výsledek se odečítá za 1, 3, 6 a 9 týdnů, pro stanovení počtů se použijí výsledky po 9 týdnech inkubace. V případě, že kmen neroste při určité teplotě, se výsledky počítají jen z těch teplot inkubace, při nichž je kmen schopen růst (některé mykobakterie nerostou při teplotě nižší než 37 °C). U vyrostlých kolonií se zaznamenává jejich morfologie a pigmentace a mikroskopicky se Ziehl-Neelsenovým barvením ověří jejich acidorezistence. V případě pozitivity se provádí ve specializovaných mykobakteriologických laboratořích druhová identifikace izolovaného kmene.

Počty mykobakterií na 1 l vody se vypočtou ve vztahu k objemu přefiltrované vody, objemu vzorku po centrifugaci, počtu očkovaných ploten a velikosti očkovaného inokula.

K dekontaminaci vody je možné použít také chlorhexidin. K sedimentu se přidá 10 ml 0,2% vodného roztoku chlorhexidinu, ručně protřepe a ponechá 24 hodin při pokojové teplotě. Druhý den po centrifugaci a po promytí sedimentu 10 ml sterilní destilované vody se sediment po další centrifugaci při 2000 g až 3000 g zpracuje stejně jako při metodě s laurylsulfátem sodným.

Postup stanovení:

Membránovou filtrací (filtr o porozitě 0,45 μm) se zpracuje s pomocí vodní vývěvy 1 litr vody. Pro dekontaminaci vzorku vody se použije roztok CPC ve výsledné koncentraci 0,005 %, který se připraví do sterilní destilované vody.

Dekontaminace vzorku vody je provedena následujícím způsobem: 1 díl 0,05% roztoku CPC je přidán k 9 dílům vzorku vody. Po uzavření láhve se její obsah po dobu 30 sekund protřepává, pak se nechá 30 minut stát. Poté se ihned provede filtrace přes celulózový membránový filtr o průměru 50 mm a velikosti pórů 0,45 μm.

Filtr je propláchnut po ukončení filtrace 500 ml sterilní destilované vody, aby se odstranila residua CPC.

Filtr se vyjme sterilní pinzetou a vloží do sterilní 30 ml plastikové nádobky, do níž jsou přidány 2 ml sterilní destilované vody. Na vortexu je plastiková nádobka protřepána po dobu 10 vteřin. Na povrch půd v Petriho miskách je suspenze inokulována po 0,2 ml a 0,1 ml je použita k nátěru na podložní sklíčko pro barvení metodou dle Ziehl-Neelsena. Kultivace na jedné Petriho misce s Löwenstein-Jensenovou půdou a jedné Petriho misce s Ogawovou půdou při 30 °C, 37 °C a 42 °C. Hodnocení se provádí 1x týdně do 9 týdnů inkubace.

Do protokolu se zaznamenávají zjištěné výsledky na jednotlivých půdách: počet kolonií na půdě, při masivním růstu na výseči s reprezentativním nárůstem, morfologie kolonií, mikroskopické ověření vyrostlých kolonií. Pokud je zjištěn růst více mykobakteriálních druhů, uvádí se počet každého druhu zvlášť. Pro identifikaci je odebráno 10 kolonií, z nichž je připravena subkultura na pevné půdě (Löwenstein-Jensenově nebo Ogawově) pro provedení identifikačních testů. U některých suspektních kolonií mykobakterií je možno provést vyšetření GEN Probe přímo z primokultury z dostatečného inokula. Konečné hodnocení růstu je provedeno po 9 týdnech inkubace, stejně tak uzavření negativních vyšetření (u negativních se inkubace prodlouží do 12 týdnů). Pokud v průběhu šestitýdenní inkubace přerostou všechny naočkované půdy nespecifickou bakteriální flórou, uzavře se výsledek dříve.

Pro stanovení počtů se použijí výsledky po 9 týdnech inkubace (popř. po 12 týdnech inkubace, pokud po 9 týdnech bylo vyšetření negativní). V případě, že kmen neroste při určité teplotě, se výsledky počítají jen z údajů těch teplot inkubace, při nichž je kmen schopen růst. Počty kolonií mykobakterií na 1 litr vody se vypočítají ve vztahu k objemu přefiltrované vody, objemu vzorku při vytřepávání filtru, velikosti očkovaného inokula a počtu inokulovaných ploten.

B. Ukazatele, pro které jsou stanoveny požadavky na metodu

Ukazatel Pravdivost v % limitní hodnoty ukazatele (vysvětlivka 1) Přesnost v % limitní hodnoty ukazatele (vysvětlivka 2) Mez detekce v % limitní hodnoty ukazatele (vysvětlivka 3) Vysvětlivky
akrylamid 4
amonné ionty 10 10 10
antimon 25 25 25
arsen 10 10 10
barva 25 25 25
benzen 25 25 25
benzo[α]pyren 25 25 25
beryllium 25 25 10
bor 10 10 10
bromičnany 25 25 25
celkový organický uhlík 10 10 10
1,2-dichlorethan 25 25 10
dusičnany 10 10 10
dusitany 10 10 10
epichlorhydrin 4
fluoridy 10 10 10
hliník 10 10 10
hořčík 10 10 10
chemická spotřeba kyslíku 25 25 15
manganistanem
chlor volný 10 10 10
chlorethen (vinylchlorid) 4
chloridy 10 10 10
chloritany 25 25 25
chrom 10 10 10
chuť 5
kadmium 10 10 10
konduktivita 10 10 10
kyanidy celkové 10 10 10 6
mangan 10 10 10
měď 10 10 10
microcystin-LR 25 25 25
nikl 10 10 10
olovo 10 10 10
ozon 10 10 25
pach 5
pesticidní látky 25 25 25 7
pesticidní látky celkem 8
polycyklické aromatické uhlovodíky 25 25 25 9
reakce vody 10
rtuť 20 10 20
selen 10 10 10
sírany 10 10 10
sodík 10 10 10
stříbro 15 15 10
tetrachlorethen 25 25 10 11
trihalomethany 25 25 10 12
trichlorethen 25 25 10 11
trichlormethan (chloroform) 25 25 10
vápník 10 10 10
vápník a hořčík 10 10 10
zákal 25 25 25 13
železo 10 10 10

Použité analytické metody musí být minimálně schopny stanovit koncentrace s uvedenou mezí detekce a na úrovni limitní hodnoty daného ukazatele se stanovenou pravdivostí a přesností. Ať už je citlivost dané použité analytické metody jakákoliv, musí být výsledek vyjádřen nejméně stejným počtem desetinných míst jako je uvedeno u limitní hodnoty daného ukazatele v části B přílohy č. 1.

Vysvětlivky k tabulce:

^1) Směrnice Rady 98/83/ES o jakosti vody určené pro lidskou spotřebu.

^2) § 3 odst. 1 zákona č. 258/2000 Sb., o ochraně veřejného zdraví a o změně některých souvisejících zákonů, ve znění zákona č. 274/2003 Sb. Směrnice Rady 98/83/ES o jakosti vody určené pro lidskou spotřebu.

^3) Vyhláška č. 292/1997 Sb., o požadavcích na zdravotní nezávadnost balených vod a o způsobu jejich úpravy, ve znění vyhlášky č. 241/1998 Sb. a vyhlášky č. 465/2000 Sb.

^4) § 3 odst. 4, § 3a odst. 1 až 7 a § 84 odst. 1 písm. e) zákona č. 258/2000 Sb., ve znění pozdějších předpisů.

^5) § 3 odst. 2 zákona č. 258/2000 Sb., ve znění pozdějších předpisů.

^6) Vyhláška č. 307/2002 Sb., o radiační ochraně.

^7) § 2 odst. 1 zákona č. 274/2001 Sb., o vodovodech a kanalizacích pro veřejnou potřebu a o změně některých zákonů (zákon o vodovodech a kanalizacích).

^8) Například ČSN ISO 5667-5 Jakost vod. Odběr vzorků, část 5: Pokyny pro odběr vzorků pitné vody a vody využívané při výrobě potravin a nápojů. ČSN EN ISO 5667-3 Jakost vod. Odběr vzorků, část 3: Pokyny pro konzervaci vzorků a manipulaci s nimi. ČSN ISO 5667-14 Jakost vod. Odběr vzorků, část 14: Pokyny k zabezpečení jakosti odběru vzorků vod a manipulace s nimi.

^9) § 2 písm. n) zákona č. 110/1997 Sb., o potravinách a tabákových výrobcích a o změně a doplnění některých souvisejících zákonů, ve znění pozdějších předpisů. § 2 písm. a) vyhlášky č. 137/2004 Sb., o hygienických požadavcích na stravovací služby a o zásadách osobní a provozní hygieny při činnostech epidemiologicky závažných.