LegalizeOrden de 31 de julio de 1979 por la que se establecen métodos oficiales de análisis de aceites y grasas, productos cárnicos, cereales y derivados fertilizantes, productos fitosanitarios, productos lácteos, piensos, aguas y productos derivados de la uva
8.4.1 Preparación de la muestra.‒Pesar con aproximación de 1 mg, 2,5 g de la muestra, e introducirlo en un matraz aforado de 250 ml. Añadir 200 ml de etanol al 40 por 100 (v/v) y mezclar durante una hora en el agitador. Añadir 5 ml de la solución Carrez I y agitar durante un minuto, adicionar y agitar durante el mismo tiempo con 5 ml de la solución Carrez II.
Enrasar a 250 ml con la solución de etanol (8.3.1), homogeneizar y filtrar. Tomar 200 ml del filtrado y evaporar aproximadamente hasta la mitad del volumen, a fin de eliminar la mayor parte del etanol. Transvasar en su totalidad el residuo de evaporación con ayuda de agua caliente a un matraz aforado de 200 ml y enfriar, a continuación enrasar con agua y filtrar si es necesario. Esta solución será utilizada para la determinación de azúcares reductores y después de la inversión para la determinación de azúcares totales.
8.4.2 Determinación de azúcares reductores.‒Tomar como máximo, 25 ml de la solución preparada según 8.4.1 y que contenga menos de 60 mg de azúcares reductores, expresado en glucosa. Si es necesario, completar el volumen hasta 25 ml con agua destilada y determinar la cantidad de azúcares reductores según Luff-Schoorl. El resultado será expresado en tantos por ciento de glucosa.
8.4.3 Determinación de azúcares totales previa inversión.‒Tomar 50 ml de la solución 8.4.1 y llevar a un matraz aforado de 100 ml. Añadir unas gotas de la solución rojo de metilo y adicionar lentamente agitando 15 ml de la solución de ácido clorhídrico 4 N hasta viraje a rojo. Añadir 15 ml de ácido clorhídrico 0,1 N y sumergirlo en un baño de agua caliente a ebullición durante treinta minutos. Refrigerar hasta 20 °C y añadir a continuación 15 ml de la solución de hidróxido sódico 0,1 N (8.3.7). Enrasar a 100 ml con agua y homogeneizar.
Tomar una cantidad que no exceda de 25 ml y contenga menos de 60 mg de azúcares reductores expresado en glucosa. Si es necesario, completar el volumen hasta 25 ml con agua destilada y determinar la cantidad de azúcares reductores según Luff-Schoorl. El resultado será expresado en tantos por ciento de glucosa. De expresarlo en sacarosa, se debe multiplicar por el factor 0,95.
8.4.4 Valoración de Luff-Schoorl.‒Tomar 25 ml del reactivo Luff-Schoorl (8.3.17) y llevarlo a un Erlenmeyer de 300 ml; añadir 25 ml exactamente medidos de la solución defecada de azúcares, adicionar un poco de piedra pómez y calentar agitando sobre la llama del mechero. Colocar inmediatamente el Erlenmeyer sobre una tela metálica, perforada por una abertura de 6 cm de diámetro y regulando la llama de manera que solamente el fondo del Erlenmeyer sea calentado. Adoptar en seguida un refrigerante de reflujo sobre el Erlenmeyer; a partir de este momento, hacer hervir la solución y mantener en ebullición durante diez minutos exactamente. Refrigerar inmediatamente al chorro de agua fría durante cinco minutos y proceder a su valoración.
Añadir 10 ml de la solución de ioduro potásico (8.3.14) inmediatamente después y con cuidado 25 ml de ácido sulfúrico 6 N (8.3.13). Valorar a continuación mediante la solución de tiosulfato de sodio 0,1 N (8.3.9) hasta la aparición de color amarillo, añadir en ese momento la solución de almidón y terminar de valorar.
Efectuar la misma valoración sobre una mezcla que contenga 25 ml exactamente medidos del reactivo de Luff-Schoorl, 25 ml de agua, 10 ml de la solución de ioduro de potasio (8.3.14) y 25 ml de la solución de ácido sulfúrico 6 N (8.3.13), sin llegar a ebullición.
8.5 Cálculos.
Establecer por medio de la tabla I la cantidad de glucosa en mg correspondiente a la diferencia entre las dos valoraciones, según los ml de tiosulfato de sodio 0,1 N gastados en cada una de las valoraciones.
Expresar los resultados en tanto por ciento de la muestra.
8.6 Observaciones.
8.6.1 En caso de alimentos muy ricos en melazas u otros alimentos poco homogéneos, pesar 20 g e introducirlos en un matraz aforado de un litro 500 ml de agua. Mezclar durante una hora en el agitador. Defecar mediante los reactivos de Carrez I y II (8.3.2 y 8.3.3), como se describe en 8.4.1, utilizando de todos los reactivos dosis cuatro veces superiores. Llenar a 1.000 ml con etanol al 40 por 100 (v/v) (8.3). Homogeneizar y filtrar; a continuación, eliminar el etanol según 8.4.1.
En ausencia de almidón exento de productos de hidrolizado, enrasar a 1.000 ml con agua destilada.
8.6.2 En el caso de melazas y alimentos simples, ricos en azúcares y prácticamente exentos de almidón, pesar 5 g e introducirlos en un matraz aforado de 250 ml, añadir 200 ml de agua destilada y mezclar durante una hora o más en el agitador. Defecar inmediatamente por medio de los reactivos de Carrez i y II (8.3.2 y 8.3.3), según 8.4.1
Llevar a 250 mí con agua, homogeneizar y filtrar, para determinar los azúcares totales, proseguir como 8.4.3.
8.6.3 Es recomendable añadir, aproximadamente, 1 ml de isopentanol (sin tener en cuenta el volumen) antes de la ebullición, con el reactivo Luff-Schoorl para evitar la formación de espuma.
8.6.4 La diferencia entre la cantidad de azúcares totales después de la inversión, expresada en glucosa, y la cantidad de azúcares reductores, expresada igualmente en glucosa, multiplicada por 0,95, da la cantidad en tanto por ciento de sacarosa.
8.6.5 Para calcular la cantidad de azúcares reductores, excluyendo la lactosa, se puede determinar de las siguientes formas:
8.6.5.1 Para un cálculo aproximado, multiplicar por 0,675 la cantidad de lactosa obtenida, por determinación separada, y restar el resultado obtenido de la cantidad en azúcares reductores.
8.6.5.2 Para el cálculo preciso de azúcares reductores, excluyendo la lactosa, es necesario partir de la misma muestra (8.4.1) para las dos determinaciones finales. Uno de los análisis es efectuado a partir de la solución obtenida en 8.4.1 y el otro sobre una parte de la solución obtenida para la valoración de la lactosa según el método para la determinación de lactosa.
En los casos 8.6.5.1 y 8.6.5.2, la cantidad de azúcares presentes se determinan según el método de Luff-Schoorl, expresado en mg de glucosa.
La diferencia entre los dos valores se expresa en tanto por ciento de la muestra.
8.7 Bibliografía.
1. Journal Officiel des Communautés Européennes. Número L 155/32.
TABLA I
Para 25 ml de reactivo Luff-Schoorl
| ml | mg | Diferencia | mg | Diferencia | mg | Diferencia |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Na2S2O3 0,1 N | Glucosa, fructosa Azúcares invertidos C6H12O6 | Glucosa, fructosa Azúcares invertidos C6H12O6 | Lactosa C12H22O11 | Lactosa C12H22O11 | Maltosa C12H22O11 | Maltosa C12H22O11 |
| 1 | 2,4 | 2,4 | 3.6 | 3,7 | 3,9 | 3,9 |
| 2 | 4,8 | 2,4 | 7,3 | 3,7 | 7,8 | 3,9 |
| 3 | 7,2 | 2,5 | 11,0 | 3,7 | 11,7 | 3,9 |
| 4 | 9,7 | 2,5 | 14.7 | 3,7 | 15,6 | 4,0 |
| 5 | 12,2 | 2,5 | 18 4 | 3,7 | 19,6 | 3,9 |
| 6 | 14 7 | 2,5 | 22 I | 3,7 | 23,5 | 4,0 |
| 7 | 17,2 | 2 6 | 25,8 | 3,7 | 27,5 | 4,0 |
| 8 | 19,8 | 2,6 | 29,5 | 3,7 | 31,5 | 4,0 |
| 9 | 22,4 | 2,6 | 33,2 | 3,8 | 35,5 | 4,0 |
| 10 | 25,0 | 2,6 | 37,0 | 3,8 | 39,5 | 4,0 |
| 11 | 27,6 | 2,7 | 40,8 | 3,8 | 43,5 | 4,0 |
| 12 | 30,3 | 2,7 | 44,6 | 3,8 | 47,5 | 4,1 |
| 13 | 33,0 | 2,7 | 48,4 | 3,0 | 51,6 | 4,1 |
| 14 | 35,7 | 2,8 | 52,2 | 3,8 | 55,7 | 4,1 |
| 15 | 38,5 | 2,8 | 56,0 | 3,9 | 59,8 | 4,1 |
| 16 | 41,3 | 2,9 | 59,9 | 3,9 | 63,9 | 4,1 |
| 17 | 44,2 | 2,9 | 63,8 | 3,9 | 68,0 | 4,2 |
| 18 | 47,1 | 2,9 | 67,7 | 4,0 | 72,2 | 4,3 |
| 19 | 50,0 | 3,0 | 71,7 | 4,0 | 76,5 | 4,4 |
| 20 | 53,0 | 3,0 | 75,7 | 4,1 | 80,9 | 4,5 |
| 21 | 56,0 | 3,1 | 79,3 | 4,1 | 85,4 | 4,6 |
| 22 | 59,1 | 3,1 | 83,9 | 4,1 | 90,0 | 4,6 |
| 23 | 62,2 | 88,0 | 94,6 |
9. ACIDEZ DE LA GRASA
9.1 Principio.
Las materias grasas son extraídas por éter dietílico y subsiguiente neutralización con hidróxido sódico.
9.2 Material y aparatos.
9.2.1 Extractor tipo Soxhlet o equivalente.
9.2.2 Aparato de calefacción a temperatura regulable, antideflagrante.
9.2.3 Estufa de desecación a vacío (menos de 100 Torr) (1 Torr = 1 mmHg = 1/760 atm).
9.3 Reactivos.
9.3.1 Éter dietílico anhidro d = 0,720, p. e., 34,5 °C, exento de peróxidos 14 (a).6.11.
9.3.2 Sulfato sódico, anhidro.
9.3.3 Ácido clorhídrico 3 N.
9.3.4 Material de filtración; por ejemplo, tierra de diatomeas.
9.3.5 Tetracloruro de carbono.
9.3.6 Alcohol etílico.
9.3.7 Solución de hidróxido sódico 0,1 N.
9.4 Procedimiento.
9.4.1 Pesar, con aproximación de 1 mg, 5 g de la muestra y mezclar con 2 o 3 g (o más, si es necesario) de sulfato sódico anhidro. Introducir la mezcla en un cartucho de extracción exento de materias grasas y recubierto de un tapón de algodón desengrasado.
Poner el cartucho en un extractor y extraer durante seis horas con éter dietílico.
Regular el calor para obtener 15 extracciones o menos a la hora. Recoger el extracto etéreo en un matraz seco, conteniendo algunos fragmentos de piedra pómez y tarar. Reemplazar los fragmentos de piedra pómez por perlas de vidrio cuando la materia grasa debe ser objeto de análisis cualitativos posteriores.
Eliminar el éter por destilación y secar seguidamente el residuo a evaporación durante una hora y media en la estufa de desecación a vacío a temperatura de 75 °C. Enfriar en desecador y pesar. Efectuar una segunda desecación durante 30 minutos para asegurar que las pesadas de materia grasa son constantes (la diferencia de pesadas debe ser inferior a 1 mg).
9.4.2 Para los productos de contenido alto en materias grasas, difíciles de triturar o no apropiados para tomar una porción de una vez por no estar homogéneos, proceder como sigue: Pesar, con la aproximación de 1 mg, 20 g de muestra y mezclar con 10 g o más de sulfato sódico anhidro. Proceder a la extracción con éter dietílico como se indica anteriormente. Redisolver el extracto en tetracloruro de carbono y llevarlo a un matraz aforado de 500 ml y homogeneizar. Tomar 50 ml de la solución y llevarla a un pequeño matraz seco, añadir unos trozos de piedra pómez y tarar. Eliminar el disolvente por destilación, secar y proseguir la operación como se indica anteriormente. Eliminar el disolvente del residuo de extracción que se encuentra en el cartucho y moler el residuo con finura de 1 mm. Colocar de nuevo el producto en el cartucho de extracción (no añadir sulfato sódico), extraer con éter dietílico y proseguir la operación como se indica anteriormente.
Disolver el extracto etéreo con 15 ml de una mezcla a volúmenes iguales de éter y alcohol dietílico de 96º y valorar con hidróxido sódico N/10 de factor conocido empleando fenolftaleína como indicador hasta color rosa persistente. Se hace un testigo en blanco para restarle la acidez de la mezcla alcohol-etérea.
9.5 Cálculo.
Expresar el resultado en tanto por ciento de acidez en ácido oleico:
Siendo:
V = volumen, en ml, de NaOH N/10 gastados, restándole los gastados en la prueba testigo.
P = peso de grasa obtenido en la extracción,
9.6 Observaciones.
9.6.1 Para el ensayo de los peróxidos verter 10 ml de éter en una pequeña probeta tapada con tapón de vidrio, previamente enjuagada con éter, añadir 1 ml de solución al 10 por 100 de yoduro de potasio, recién preparada. Agitar y dejar reposar durante un minuto No debe aparecer ningún color amarillo en ninguna de las capas. El éter dietílico podrá mantenerse exento de peróxidos añadiendo una lámina de cinc húmeda, que deberá sumergirse completamente en una solución ácida diluida de sulfato de cobre durante un minuto y después lavar con agua. Utilizar por litro una superficie de 80 cm2 aproximadamente de lámina de cinc, cortada en bandas suficientemente largas para que lleguen por lo menos hasta la mitad del recipiente.
9.6.2 En harinas de pescado empléese como indicador azul alcalino 6-B disuelto al 0,5 por 100 en etanol.
10. CALCIO
10.1 Principio.
Incineración de la muestra y precipitación del calcio mediante ácido clorhídrico en forma de oxalato cálcico y valoración del ácido oxálico formado con una solución de permanganato potásico previa disolución del precipitado con ácido sulfúrico. Aplicable a los alimentos de animales.
10.2 Material y aparatos.
10.2.1 Matraz aforado de 250 ml de capacidad.
10.2.2 Erlenmeyer de 250 ml de capacidad.
10.2.3 Crisol de platino, cuarzo o porcelana.
10.2.4 Crisoles filtrantes de vidrio, porosidad G4.
10.2.5 Horno eléctrico con circulación de aire y regulador automático, para regular a 550 °C.
10.2.6 Baño de agua.
10.3 Reactivos.
10.3.1 Ácido clorhídrico d: 1,14.
10.3.2 Ácido nítrico d: 1.40.
10.3.3 Ácido sulfúrico d: 1,13.
10.3.4 Amoníaco d: 0,98.
10.3.5 Solución saturada de oxalato amónico.
10.3.6 Solución al 30 por 100 (p/v) de ácido cítrico.
10.3.7 Solución al 5 por 100 (p/v) de cloruro de amonio.
10.3.8 Solución al 0,04 por 100 (p/v) de verde de bromocresol.
10.3.9 Solución de permanganato potásico: 0,1 N.
10.4 Procedimiento.
Pesar, con aproximación de 1 mg, 5 g de la muestra a analizar (o más si es necesario), calcinarla a 550 °C y transvasar las cenizas a un Erlenmeyer de 250 ml. Añadir 40 ml de ácido clorhídrico (10.3.1), 60 ml de agua y algunas gotas de ácido nítrico (10 3.2). Llevar a ebullición y mantenerlo así durante treinta minutos Enfriar, transvasar la solución a un matraz aforado de 250 ml, enjuagar el Erlenmeyer y completar el volumen con agua, homogeneizar y filtrar.
Tomar con una pipeta según la cantidad presumible de calcio, una alícuota que contenga de 10 a 40 mg de calcio e introducirla en un Erlenmeyer de 250 ml. Añadir 1 ml de la solución de ácido cítrico (10.3.6) y 5 ml de solución de cloruro de amonio (10.3.7). Completar el volumen a 100 ml aproximadamente con agua. Llevar a ebullición, añadiendo de 8 a 10 gotas de solución de verde de bromocresol (10.3.8) y 30 ml de solución caliente de oxalato de amonio (10.3.5). Si aparece un precipitado, disolver éste mediante la adición de algunas gotas de ácido clorhídrico r10.3 1).
Neutralizar en seguida muy lentamente con amoníaco (10.3.4), agitando constantemente, hasta obtener un pH 4,4-4,6 (viraje del indicador). Colocar el Erlenmeyer en un baño de agua hirviendo durante treinta minutos, dejando reposar el precipitado formado Retirarlo del baño, dejarlo reposar durante una hora y filtrar en un crisol filtrante Gμ. Lavar el Erlenmeyer y el crisol con agua hasta la total eliminación del exceso de oxalato de amonio (la ausencia de cloruros en el agua de lavado indica que el lavado es suficiente).
Disolver el precipitado sobre el filtro con 50 ml de ácido sulfúrico caliente (10.3.3), enjuagar el crisol con agua caliente hasta llevar el filtrado a 10 ml aproximadamente. Calentar a 70-80 °C y valorar mediante la solución de permanganato potásico (10.3.9) hasta la obtención de una coloración rosa persistente durante un minuto.
10.5 Cálculo.
Un ml de permanganato potásico 0,1 N corresponde a 2,004 mg de calcio.
Expresar el resultado obtenido en tanto por ciento de la muestra.
10.6 Observaciones.
10.6.1 Para pequeñas cantidades de calcio, proceder como en 10.5. Filtrar el precipitado de oxalato de calcio sobre un papel de filtro sin cenizas y calcinarlo en un crisol a 550 °C. Recuperar el residuo con algunas gotas de ácido sulfúrico (10.3.3), evaporar a sequedad, calcinar de nuevo a 550 °C y pesar.
Si P representa el peso de sulfato cálcico obtenido, la cantidad en calcio de la alícuota tomada será igual a P x 0,2944.
10.6.2 Si la muestra está constituida exclusivamente de materias minerales, proceder a la disolución por ácido clorhídrico sin incineración previa. Para los productos tales que los fosfatos alumínico-cálcicos difíciles de disolver en los ácidos, proceder a una fusión alcalina antes de la disolución. Mezclar íntimamente en un crisol de platino la parte tomada con cinco veces su peso de una mezcla compuesta en partes iguales de carbonato de potasio y de carbonato de sodio. Calentar con precaución hasta la fusión completa de la mezcla, refrigerar y disolver con ácido clorhídrico.
10.6.3 Si la cantidad en magnesio de la muestra es elevada, proceder a una segunda precipitación con oxalato de calcio.
10.7 Referencias.
I Journal Officiel des Communautés Européennes. Número L 155/17.
11. GRASA
(En productos lácteos reengrasados)
11.1 Principio.
Determinación de la grasa por el método Gerber.
11.2 Material y aparatos.
11.2.1 Butirómetros contrastados, con graduaciones de 0-6 % de grasa y con divisiones del 0,1 %. Se pueden utilizar butirómetros con graduaciones de 0 a 5 % y divisiones del 0,1 % cuando muestra tenga un contenido en grasa inferior al 5%.
11.2.2 Tapones troncocónicos de goma u otro tipo, apropiados.
11.2.3 Pipetas contrastadas de 1 y 10 ml.
11.2.4 Vidrios de reloj.
11.2.5 Baño de agua regulable a 65° ± 1°C.
11.2.6 Centrífuga capaz de alcanzar 1.200 r.p.m.
11.2.7 Embudo desprovisto de cuello y vástago para la introducción de la muestra en el butirómetro.
11.3 Reactivos.
11.3.1 Ácido sulfúrico de densidad d = 1,82.
11.3.2 Alcohol isoamílico de densidad d = 0,815 e intervalo de destilación de 128° a 132 °C.
11.4 Procedimiento.
11.4.1 Pesar, con precisión de 0,1 mg, 1.100 g de producto e introducirlo en el butirómetro a través del embudo. Añadir, a través del embudo, 10 ml de agua tibia (40 °C), arrastrando lo que haya podido adherirse al mismo. Tapar y agitar fuertemente para disolver la leche.
Seguidamente añadir 10 ml de ácido sulfúrico haciéndolo resbalar suavemente por las paredes del butirómetro. Añadir 1 ml de alcohol isoamílico. Cerrar el butirómetro con el tapón de goma, agitar suavemente y centrifugar a 1.200 r.p.m. durante tres a cinco minutos. Sacar el butirómetro de la centrífuga e introducir en el baño de agua a 65 °C. Dejar transcurrir algunos minutos y efectuar la lectura.
11.5 Expresión de los resultados.
Leer en el butirómetro, en la escala dividida, la altura que ha alcanzado la columna de grasa, habiéndose ajustado a cero el líquido que no contiene grasa. Los grados de la escala indican las decenas, y las décimas, las unidades por ciento. Se puede apreciar perfectamente un 0,5 por 100.
11.6 Observaciones.
11.6.1 En el caso de sueros desprovistos de caseína, pueden producir carbonizaciones que dificultan la lectura (debido a que el ácido sulfúrico, de densidad d = 1,82, resulta demasiado concentrado). En este caso se puede diluir al 10 por 100 (v/v) con agua destilada.
11.6.2 En los productos con grasa muy micronizada conviene repetir por tres veces las centrifugaciones, el calentamiento a 65 °C y las lecturas, hasta obtener resultados constantes.
11.7 Referencias.
1. Instituto de Racionalización y Normalización del Trabajo. Una Norma Española 64.029.
12. CENIZAS BRUTAS
12.1 Principio.
Incineración de la muestra a 550 °C y pesada del residuo hasta peso constante.
12.2 Material y aparatos.
12.2.1 Placa calefactora.
12.2.2 Horno eléctrico con regulación de temperatura.
12.2.3 Crisoles de platino o cuarzo, rectangulares (60 x 40 x 25 mm) o redondos.
12.2.4 Nitrato de amonio.‒Solución al 20 por 100.
12.3 Procedimiento.
Pesar alrededor de 5 g de muestra, con una aproximación de 1 mg (para los productos que tengan tendencia a «esponjarse», pesar 2,5 g) en un crisol previamente calcinado y tarado. Colocar el crisol sobre la placa calefactora hasta carbonización de la muestra. Introducir el crisol en el horno regulado a 550 ± 5 °C. Mantener a esta temperatura hasta la obtención de cenizas blancas, gris claro o rojizas, aparentemente desprovistas de partículas carbonosas. Colocar el crisol en un desecador, dejar enfriar y pesar inmediatamente.
12.4 Cálculo.
El porcentaje de cenizas sobre materia natural se obtiene por la fórmula siguiente:
Siendo:
P = peso, en g, de la cápsula con la muestra.
P1 = peso, en g, de la cápsula con las cenizas.
P2 = peso, en g, de la cápsula vacía.
12.5 Observaciones.
12.5.1 Las materias difíciles de incinerar deben someterse a una primera incineración de tres horas, se enfrían y se les adiciona algunas gotas de una solución al 20 por 100 de nitrato de amonio. Continuando la incineración después de la desecación en estufa.
Repetir eventualmente la operación hasta incineración completa.
12.5.2 Para las materias resistentes al tratamiento anterior, operar como sigue: Después de una incineración de tres horas, arrastrar las cenizas con agua caliente y filtrar sobre un pequeño filtro de cenizas conocidas. Incinerar el filtro y su contenido en el crisol inicial.
Llevar el filtrado al crisol frío, evaporar a sequedad, incinerar y pesar.
12.5.3 En el caso de aceites y grasas, pesar 25 g en un crisol de capacidad apropiada. Carbonizar inflamando la muestra por medio de una mecha de papel de filtro sin cenizas. Después de la combustión, humedecer con la mínima cantidad de agua posible. Desecar y continuar como se indica en 12.5.
12.6 Referencias.
1. Journal Officiel des Communautés Européennes. Número L 155/20.
Se deroga en cuanto se oponga, y en particular los métodos coinidentes de análisis, por la disposición derogatoria de la Orden de 23 de mayo de 1989. Ref. BOE-A-1989-12209
ANEJO VIII. Métodos de análisis de aguas
(Derogado).
Se deroga por la disposición derogatoria de la Orden de 1 de julio de 1987. Ref. BOE-A-1987-15871
ANEJO IX. Métodos de análisis de productos derivados de la uva
VINOS
42. INVESTIGACIÓN DE DERIVADOS MONOHALOGENADOS DEL ÁCIDO ACÉTICO
42.1 Principio.
Extracción de los derivados monohalogenados del ácido acético con éter sulfúrico previamente acidificado. Formación de tioíndigo, de color rojo, que se extrae con cloroformo.
El método permite detectar de 1,5 a 2 mg/l de ácido monocloroacético y las cantidades correspondientes de otros derivados monohalogenados.
42.2 Material y aparatos.
42.2.1 Éter sulfúrico.
42.2.2 Ácido sulfúrico (1 + 4) (v/v).
42.2.3 Sulfato sódico anhidro desecado en estufa a 105 °C.
42.2.4 Hidróxido sódico 0,5 N.
42.2.5 Ácido tiosalicílico (2 mercaptobenzoico) al 3 por 100 (p/v) en NaOH 1,5 N.
42.2.6 Ferricianuro potásico al 2 por 100 (preparar inmediatamente antes de usar).
42.2.7 Cloroformo.
42.2.8 Baño de agua.
42.2.9 Estufa eléctrica.
42.2.10 Embudos de separación.
42.2.11 Cápsulas de porcelana 70-80 mm ∅.
42.2.12 Tubos de 150 x 15 mm con tapón esmerilado.
42.2.13 Tubos de 150 x 15 mm con llave inferior.
42.3 Procedimiento.
Introducir en un Erlenmeyer de 500 cc y boca esmerilada 100 ml de vino, 5 ml de ácido sulfúrico (1 + 5) y, agitando, 100 ml de éter sulfúrico, continuando en un agitador durante una hora. Separar en embudo de decantación y descartar la capa interior. Añadir 8-10 g de sulfato sódico anhidro al extracto éter, agitando vigorosamente. Verter el éter en otro embudo de 500 ml, agregando sucesivamente: 5,0, 2,5 y 2,5 ml de NaOH 0,5 N, agitando un minuto cada vez y reuniendo las tres capas inferiores alcalinas obtenidas en un tubo con tapón esmerilado, en el cual se habrá vertido previamente 1 ml de la solución de ácido tiosalicílico. Agitar enérgicamente durante treinta segundos y transferir el contenido del tubo a una cápsula de porcelana, evaporando durante una hora en baño de agua (90-100 ºC), tiempo que habrá de respetarse aun cuando el agua se evapore mucho antes.
Si se formara una costra sobre la superficie, es conveniente romperla con una varilla fina de vidrio, lo que facilitará la evaporación. Pasado este tiempo, llevar la cápsula con el residuo seco a la estufa mantenida a 200 °C durante treinta minutos exactamente, pasados los cuales se retira y se deja enfriar a la temperatura ambiente. Añadir 2 ml de agua destilada que disolverá la mayor parte del extracto y recoger en un tubo con llave en su parte inferior; agregar otros 2 ml de agua destilada para lavar la cápsula y, por último, 3 ml de solución de ferricianuro, recogiendo todo ello con los primeros, agitando bien el tubo durante treinta segundos para facilitar la oxidación. Conviene asegurarse de que todo el residuo se disolvió bien en los 4 ml de agua destilada antes de añadir la solución de ferricianuro. En presencia de un derivado monohalogenado se desarrollará una coloración rojo-anaranjado (apenas perceptible para contenidos inferiores a 0,1 mg). Agregar 3 ml de cloroformo; agitar alternativamente tres-cuatro veces y decantar. Si el extracto clorofórmico inferior se colorea de rojo-fucsia o rosado, indica la presencia de derivados monohalogenados del ácido acético.
42.4 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.l.V.A 35h.
2. Cabezuco, Gorostiza y Garrido: Determinación de derivados monohalogenados del ácido acético. Instituto de Fermentaciones (1971, ATA, vol. II, núm. 1, páginas 145-151).
43. GRADO ALCOHÓLICO EN POTENCIA
43.1 Principio.
Es el volumen en litros de alcohol susceptible de obtenerse por fermentación total de los azúcares contenidos en 100 litros de vino.
43.2 Material y aparatos.
Como en 7(a).2 o 7(b).2.
43.3 Reactivos.
Como en 7(a).3 o 7(b).3.
43.4 Procedimiento.
Como en 7(a) o 7(b).
43.5 Cálculos.
Donde:
N = g/l de azúcares reductores de la muestra.
44. GRADO ALCOHÓLICO TOTAL
44.1 Principio.
Se considera el grado alcohólico total como la suma del grado alcohólico adquirido determinado según 5(a) o 5(b), y del grado alcohólico potencial, determinado según 43.
44.2 Cálculo.
Grado alcohólico total = Grado alcohólico adquirido + Grado alcohólico potencial.
7(c). AZÚCARES REDUCTORES
(Valoración)
7(c).1 Principio.
Eliminación de las materias reductoras distintas de los azúcares reductores por defecación, y posterior valoración basada en la acción reductora de los azúcares sobre una solución cupro-alcalina.
7(c).2 Material y aparatos.
7(c).2.1 Erlenmeyer de 300 ml con refrigerante de reflujo.
7(c).2.2 Material necesario para volumetría.
7(c).2.3 Baño de agua.
7(c).3 Reactivos.
7(c).3.1 Solución cupro-alcalina:
Disolver por separado: 25 g de sulfato de cobre puro (SO4Cu • 5H2O) en 100 ml de agua: 50 g de ácido cítrico en 300 ml de agua y 388 g de carbonato de sodio cristalizado en 300-400 ml de agua caliente. Mezclar la solución de ácido cítrico y la de carbonato de sodio. Añadir a continuación la solución de sulfato de cobre y completar el volumen con agua hasta un litro.
7(c).3.2 Solución de ioduro de potasio al 30 por 100. Conservar en frasco topacio.
7(c).3.3 Solución de ácido sulfúrico al 25 por 100 en volumen.
7(c).3.4 Solución de engrudo de almidón de 5 g/l; contendrá 200 g/l de cloruro de sodio para asegurar su conservación. Esta solución debe de ser mantenida diez minutos en ebullición en el momento de su preparación.
7(c).3.5 Tiosulfato de sodio N/10.
7(c).4 Procedimiento.
Poner en el Erlenmeyer de 300 ml, 25 ml de la solución cuproalcalina y 25 ml del vino previamente defecado según 7(a) o 7(b). Este volumen añadido no debe contener más de 60 mg de azúcares reductores.
Añadir algunos granos de piedra pómez y llevar a ebullición, que debe de ser alcanzada en dos minutos, adaptando el Erlenmeyer al refrigerante de reflujo y mantener exactamente durante diez minutos la ebullición.
Enfriar inmediatamente bajo corriente de agua fría. Añadir 10 ml de la solución de ioduro de potasio al 30 por 100, 25 ml de la solución de ácido sulfúrico al 25 por 100 y 2 ml de engrudo de almidón. A continuación, valorar con la solución 0,1 N de tiosulfato de sodio.
Efectuar una prueba en blanco, sustituyendo los 25 ml del vino previamente defecados por igual volumen de agua destilada y tratar como se ha indicado antes para la muestra.
7(c).5 Cálculos.
La cantidad de azúcar, expresada en azúcar invertido contenida en la muestra analizada, se obtiene en la tabla 7(c).1 en función del n' ‒ n de ml de tiosulfato utilizado.
Siendo:
n = Volumen, en ml, de solución de tiosulfato de sodio 0,1 N utilizado en la valoración de la muestra.
n' = Volumen, en ml, de solución de tiosulfato de sodio 0,1 N utilizado en la prueba en blanco.
Expresar el contenido del vino en g de azúcar invertido por litro, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas en el curso de la defecación del volumen de la muestra analizada.
7(c).6 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A 4e 29-31.
TABLA 7(c).1
Azúcares reductores, expresados en mg
| MI N/10 de tiosulfato de sodio | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| MI N/10 de tiosulfato de sodio | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal | Primera cifra decimal |
| 0 | 0,0 | 0,3 | 0,6 | 1,0 | 1,3 | 1,6 | 1,9 | 2,2 | 2,6 | 2,9 |
| 1 | 3,2 | 3,5 | 3,8 | 4,2 | 4,5 | 4,8 | 5,1 | 5,4 | 5,7 | 6,1 |
| 2 | 6,4 | 6,7 | 7,1 | 7,4 | 7,7 | 8,1 | 8,4 | 8,7 | 9,0 | 9,4 |
| 3 | 9,7 | 10,0 | 10,4 | 10,7 | 11,0 | 11,4 | 11,7 | 12,0 | 12,3 | 12,7 |
| 4 | 13,0 | 13,3 | 13,7 | 14,0 | 14,4 | 14,7 | 15,0 | 15,4 | 15,7 | 16,1 |
| 5 | 16,4 | 16,7 | 17,1 | 17,4 | 17,8 | 18,1 | 18,4 | 18,8 | 19,1 | 19,5 |
| 6 | 19,8 | 20,1 | 20,5 | 20,8 | 21,2 | 21,5 | 21,8 | 22,2 | 22,5 | 22,9 |
| 7 | 23,2 | 23,5 | 23,9 | 24,2 | 24,6 | 24,9 | 25,2 | 25.6 | 25,9 | 26,3 |
| 8 | 26,6 | 26,9 | 27,3 | 27,6 | 28,0 | 28,3 | 28,6 | 29,0 | 29,3 | 29,7 |
| 9 | 30,0 | 30,3 | 30,7 | 31,0 | 31,3 | 31,7 | 32,0 | 32,4 | 32,7 | 33,0 |
| 10 | 33,4 | 33,7 | 34,1 | 34,4 | 34,8 | 35,1 | 35,4 | 35,8 | 36,1 | 36,5 |
| 11 | 36,8 | 37,2 | 37,5 | 37,8 | 39,2 | 38,6 | 38,9 | 39,3 | 39,6 | 40,0 |
| 12 | 40,3 | 40,7 | 41,0 | 41,4 | 41,7 | 42,1 | 42,4 | 42,8 | 43,1 | 43,5 |
| 13 | 43,8 | 44,2 | 44,5 | 44,9 | 45,2 | 45,6 | 45,9 | 46,3 | 46,6 | 47,0 |
| 14 | 47,3 | 47,7 | 48,0 | 48,4 | 48.7 | 49,1 | 49,4 | 49,8 | 50,1 | 50,5 |
| 15 | 50,8 | 51,2 | 51,5 | 51,9 | 52,2 | 52,6 | 52,9 | 53,3 | 53,6 | 54,0 |
| 16 | 54,3 | 54,7 | 55,0 | 55,4 | 55,8 | 56,2 | 56,5 | 56,9 | 57,3 | 57,6 |
| 17 | 58,0 | 58,4 | 58,8 | 59,1 | 59,5 | 59,9 | 60,3 | 60,7 | 61,0 | 61,4 |
| 18 | 61,8 | 62,2 | 62,5 | 62,9 | 63,3 | 63.7 | 64,0 | 64,4 | 64,8 | 65,1 |
| 19 | 65,5 | 65,9 | 66,3 | 66,7 | 67,1 | 67.5 | 67,8 | 68,2 | 68,6 | 69,0 |
| 20 | 69,4 | 69,8 | 70,2 | 70,6 | 71,0 | 71,4 | 71,7 | 72,1 | 72,5 | 72,9 |
| 21 | 73,3 | 73,7 | 74,1 | 74,5 | 74,9 | 75,3 | 75,6 | 76,0 | 76.4 | 76,8 |
| 22 | 77,2 | 77,6 | 78,0 | 78,4 | 78,8 | 79,2 | 79,6 | 80.0 | 80,4 | 80,8 |
| 23 | 81,2 | 81,6 | 82,0 | 82,4 | 82,8 | 83,2 | 83,6 | 84,0 | 84,4 | 84,8 |
| 24 | 85,2 | 85,6 | 86,0 | 86,4 | 86,8 | 87,2 | 87,6 | 88,0 | 88,4 | 88,8 |
| 25 | 89,2 | 89,6 | 90,0 | 90,4 | 90,8 | 91,2 | 91,6 | 92,0 | 92,4 | 92,8 |
30. CLORUROS
30.1 Principio.
Determinación directa de cloruros por potenciometría utilizando el electrodo Ag/AgCl.
30.2 Material y aparatos.
30.2.1 pH-metro con escala que permita apreciar 2 mV.
30.2.2 Agitador magnético.
30.2.3 Electrodo Ag/AgCl, con una solución saturada de nitrato de potasio como electrólito.
30.2.4 Microbureta graduada en 1/100 de ml.
30.3 Reactivos.
30.3.1 Solución patrón de cloruros.‒Disolver 2,1027 g de cloruro de potasio puro para análisis (máximo 0,005 por 100 de bromo previamente desecado, en agua destilada hasta 1 litro. 1 ml de esta solución contiene 1 mg de ion cloro.
30.3.2 Solución de nitrato de plata.‒Disolver 4,7912 g de nitrato de plata en una solución alcohólica al 10 por 100 (v/v) hasta 1 litro, 1 ml de esta solución corresponde a 1 mg de ion cloro.
30.3.3 Ácido nítrico concentrado (d = 1,40).
30.4 Procedimiento.
30.4.1 Determinación del potencial del punto de equivalencia.
Introducir 5,0 ml de la solución patrón de cloruros en un vaso de 150 ml. Diluir aproximadamente a 100 ml con agua destilada y acidificar con 10 ml de ácido nítrico (30.3.3). Introducir los electrodos. Añadir 10 ml de la solución de nitrato de plata, agitando moderadamente: adicionar los cuatro primeros mililitros en fracciones de 1 ml y leer las correspondientes lecturas en milivoltios; los dos siguientes mililitros, en fracciones de 0,2 ml y continuar adicionando en fracciones de 1 mililitro hasta que se hayan alcanzado un total de 10 ml. Después de cada adición esperar unos treinta segundos antes de hacer la correspondiente lectura en milivoltios. Llevar los valores así obtenidos sobre un papel milimetrado en función de los correspondientes mililitros de solución de nitrato de plata y a partir del punto singular de la curva obtenida determinar el potencial del punto de equivalencia.
Para comprobar el potencial del punto de equivalencia, llevar a un vaso de 150 ml 5,0 ml de la solución patrón de cloruros, 95 ml de agua destilada y 1 ml de ácido nítrico concentrado. Introducir el electrodo y valorar agitando, justamente hasta el potencial del punto de equivalencia.
Repetir esta operación hasta obtener una buena concordancia de resultados. Este control debe efectuarse antes de determinar la concentración de cloruros en cada serie de muestras a analizar.
30.4.2 Determinación.
Llevar a un vaso de 150 ml 50,0 ml de vino. Añadir 50 ml de agua destilada y 1,0 ml de ácido nítrico concentrado. Valorar a continuación siguiendo el procedimiento descrito anteriormente hasta alcanzar el potencial del punto de equivalencia.
30.5 Cálculos.
La cantidad de cloruros se determina mediante las expresiones:
0,02 n en gramos de ion cloro.
0,5633 n en miliequivalentes por litro de ion cloro.
0,0329 n en gramos de cloruro sódico por litro.
Siendo:
n = volumen, en ml, de solución de nitrato de plata necesario para alcanzar el potencial del punto de equivalencia.
30.6 Referencia.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A 15j.
45. COLORANTES SINTÉTICOS
45.1 Principio.
Concentración mediante ebullición, extracción con éter y fijación de colorantes sintéticos básicos y ácidos sobre lana y posterior confirmación por cromatografía en papel.
45.2 Material y aparatos.
45.2.1 Hebras de lana blanca previamente desengrasadas con éter.
45.2.2 Hebras de lana blanca mordentadas. Disolver 1 g de sulfato de aluminio cristalizado y 1,2 g de tartrato ácido de potasio en 500 ml de agua. Introducir en esta solución 10 g de hebras de lana blanca, previamente desengrasadas con éter y secas, agitar durante una hora y dejar reposar de dos a tres horas; transcurrido dicho tiempo, secar a temperatura ambiente.
45.2.3 Papel para cromatografía Whatman número 1 o similar.
45.2.4 Erlenmeyer de 50 ml de capacidad.
45.2.5 Ampolla de decantación de 200 ml de capacidad.
45.3 Reactivos.
45.3.1 Éter sulfúrico.
45.3.2 Hidróxido de sodio al 5 por 100.
45.3.3 Ácido acético glacial, d = 1,05.
45.3.4 Ácido acético diluido, 1/18 (v/v).
45.3.5 Ácido clorhídrico diluido 1/10 (v/v).
45.3.6 Amoníaco puro, d = 0,92.
45.3.7 Solvente número 1 para cromatografía de colorantes de carácter básico:
Butanol n: 50 ml.
Etanol: 25 ml.
Ácido acético glacial: 10 ml.
Agua destilada: 25 ml.
45.3.8 Solvente número 2 para la cromatografía de colorantes de carácter ácido:
Butanol n: 50 ml.
Etanol: 25 ml.
Amoníaco puro: 10 ml
Agua destilada: 25 ml.
45.4 Procedimiento.
45.4.1 Determinación de colorantes de carácter básico.
Poner 200 ml de vino en un Erlenmeyer de 500 ml y llevar a ebullición hasta que el vino se reduzca a un tercio de su volumen. Enfriar y neutralizar con la solución de hidróxido sódico al 5 por 100 hasta claro viraje del color natural del vino. Extraer dos veces, con 30 ml de éter cada vez, y juntar las dos fases etéreas; en ellas se encuentran eventualmente los colorantes básicos; el residuo de la extracción debe ser conservado con objeto de investigar los colorantes ácidos. Lavar dos veces el éter empleado en la extracción con 5 ml de agua, con el objeto de eliminar el hidróxido sódico; a continuación, añadir 5 ml de ácido acético diluido a la fase etérea; la presencia de un colorante básico colorea la fase ácido-acuosa; la presencia de este colorante puede confirmarse por su fijación sobre lana mordentada.
La fase ácido-acuosa obtenida se alcaliniza con amoníaco al 5 por 100; añadir 0,5 g de lana mordentada y llevar a ebullición durante un minuto; aclarar la lana bajo el chorro de agua fría; de permanecer coloreada, el vino contiene un colorante básico.
45.4.1.1 Caracterización por cromatografía de papel. A partir de la fase acético-acuosa que contiene el colorante básico, concentrar hasta 0,5 ml. Si el colorante ha sido fijado sobre lana, añadir a ésta 10 ml de agua destilada, 10 gotas de ácido acético y llevar a ebullición, y una vez retirada la lana previamente escurrida, concentrar la solución hasta 0,5 ml.
Depositar sobre papel de cromatografía 20 microlitros de la anterior solución concentrada a 3 cm del borde lateral y a 2 cm del borde inferior. Introducir dicho papel en una cubeta que contenga el solvente 45.3.7 de forma que su borde inferior esté sumergido en el solvente 1 cm. Retirar y dejar secar al aire cuando se haya alcanzado una altura del frente del solvente comprendido entre 20 o 25 cm. Identificar el colorante por medio de soluciones de colorantes sintéticos básicos depositados simultáneamente sobre el cromatograma.
45.4.2 Determinación de colorantes de carácter ácido.
Partir del residuo de vino concentrado a un tercio y neutralizado después de su extracción con éter; si no se realizó la determinación de colorante de carácter básico, poner 200 ml de vino en un Erlenmeyer de 500 ml y llevar a ebullición hasta que el vino se reduzca a un tercio de su volumen. En uno u otro caso, añadir 3 ml de ácido clorhídrico diluido (45.3.5) y 0,5 g de lana blanca; hervir durante cinco minutos, decantar el líquido y lavar la lana con agua abundante. En el Erlenmeyer que contiene la lana, añadir 100 ml de agua y 2 ml de ácido clorhídrico diluido (45.3.5); hervir durante cinco minutos, decantar el líquido ácido y repetir esta operación hasta que el líquido de lavado sea incoloro. Después de haber lavado bien la lana, para eliminar completamente el líquido ácido, añadir 50 ml de agua destilada y 10 gotas de amoníaco puro; llevar a ebullición suave durante diez minutos a fin de disolver la materia colorante artificial que eventualmente se haya fijado sobre la lana. A continuación, retirar la lana del Erlenmeyer, llevar el volumen de líquido a 100 ml y hervir hasta evaporación completa del amoníaco; una vez conseguida dicha evaporación, añadir 2 ml de ácido clorhídrico diluido (45.3.5) (comprobar que el líquido haya adquirido reacción francamente ácida, llevando una gota de éste sobre el papel indicador). Poner en el Erlenmeyer 60 mg de lana blanca y llevar a ebullición durante cinco minutos; retirar la lana y aclararla bajo el chorro de agua fría. Si después de esta operación la lana toma coloración roja, cuando se trata de vino tinto, o amarilla, si se trata de vino blanco, confirma la presencia de materia colorante orgánica artificial de naturaleza ácida. Si la coloración adquirida es débil o dudosa, repetir el tratamiento con amoníaco y hacer una segunda fijación sobre una hebra de lana de 30 mg. Si transcurrida esta segunda fijación se obtiene una coloración rosa, aunque sea débil, se deduce la presencia de colorante ácido. Recurrir para un análisis más completo a nuevas fijaciones-eluciones (hasta 4 o 5), operando siempre de forma idéntica a la empleada para la segunda fijación hasta que se obtenga una coloración rosácea que, aunque sea pálida, no ofrece lugar a dudas.
45.4.2.1 Caracterización por cromatografía de papel.
Añadir sobre la hebra de lana coloreada 10 ml de agua destilada, lo gotas de amoníaco y llevar a ebullición; retirar la lana previamente escurrida y concentrar la solución amoniacal hasta 0,5 ml. Depositar sobre papel de cromatografía 20 microlitros de la anterior solución concentrada, a 3 cm del borde lateral y a 2 cm del borde inferior; introducir dicho papel en una cubeta que contenga el solvente 45.3.8 de forma que su borde inferior esté sumergido en el solvente l cm. Retirar y dejar secar al aire cuando se haya alcanzado una altura del frente del solvente comprendida entre 20 o 25 cm. Identificar el colorante por medio de soluciones de colorantes sintéticos ácidos depositados simultáneamente sobre el cromatograma.
45.5 Referencia.
Recueil des méthodes internationales d’Analyse des vins. A43k, páginas 1-6.
46. MERCURIO
46.1 Principio.
Oxidación de la materia orgánica con ácido nítrico y crómico, reducción de las sales mercúricas por acción de Sn++, volatilización del Hg metálico, arrastre del mismo por corriente de aire y determinación de su absorbancia a 253,7 nanómetros.
Este método es aplicable a concentraciones de mercurio superiores a 0,05 mg/l.
46.2 Material y aparatos.
46.2.1 Espectrofotómetro de absorción.
46.2.2 Lámpara de mercurio.
46.2.3 Aparato para la reducción del ion mercúrico a mercurio metal y posterior arrastre de éste con corriente de aire (figura 46.1).
46.2.4 Matraces de reacción de forma cónica de 100 ml de capacidad.
46.2.5 Bomba peristáltica accionada con motor provisto de vaciador de velocidad.
46.2.6 Llave de purga en T de teflón.
46.2.7 Tubo flexible de tigón de 1/8 pulgada de diámetro interior y un metro, aproximadamente, de longitud.
46.3 Reactivos.
46.3.1 Ácido sulfúrico, exento de mercurio.
46.3.2 Oxido de mercurio.
46.3.3 Cloruro estannoso, exento de mercurio.
46.3.4 Oxido de cromo, exento de mercurio.
46.3.5 Solución de ácido crómico al 5 por 100.‒Llevar a un vaso de 500 ml 25 g de óxido de cromo y disolverlos en 25 ml de agua destilada. Añadir lentamente y agitando ácido sulfúrico concentrado hasta enrasar a 500 ml cuando la solución esté fría.
46.3.6 Solución reductora.‒Solución al 40 por 100 de cloruro estannoso en agua destilada, acidulada con sulfúrico.
46.3.7 Solución patrón.‒Disolver 1,080 g de óxido de mercurio en 100 ml de ácido clorhídrico al 50 por 100; enrasar con agua a 1.000 ml. Mediante dilución 1/1.000 se obtiene la solución de 1 mg/l.
46.4 Procedimiento.
46.4.1 Preparación de la muestra.
Tomar 1 ml de muestra y colocarla dentro de un matraz cónico. Añadir 2 ml de ácido nítrico. Cerrar con película de parafina y dejarlo en digestión durante sesenta minutos a temperatura ambiente. Añadir 5 ml de ácido crómico al 5 por 100, refrigerando durante la adición en baño de hielo. Tapar el matraz y dejarlo durante sesenta minutos, agitando cada diez minutos. Transcurrido este tiempo, añadir 15 ml de agua destilada, enfriando durante la adición con baño de hielo. Una vez fríos los matraces, añadir 2 g, aproximadamente, de sulfato de hidroxilamina, agitar y acoplar los matraces al aparato de medida. Añadir 10 ml de solución reductora. Continuar como en 46.4.3.
46.4.2 Construcción de la curva patrón.
A partir de 46.3.7, tomar 0,5, 10, 15, 20 y 25 ml. Tratarlas a continuación como se indica en 46.4.1. Estas soluciones contienen 0, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 y 0,5 partes por millón de Hg. Anotar las absorbancias obtenidas frente a las concentraciones correspondientes.
46.4.3 Determinación.
Efectuar la lectura de la absorbancia de la muestra. Una vez preparada según 46.4.1.
46.5 Referencias.
1. A. Bouchard: «Determination of mercury after soon temperature digestión by flamaless atomic absorption.» Atom. Absorpt. Newsletter, vol. 12, número 5 (115-117), 1973.
2. A. García de Jalón y J. Frías: «Un método para la determinación de mercurio en vinos mediante espectrofotometría de absorción atómica sin llama.» Ministerio de Agricultura. Abril 1972.
47. PLOMO
47.1 Principio.
Determinación del plomo por A. A. después de una concentración previa con objeto de conseguir resultados suficientemente precisos.
47.2 Material y aparatos.
47.2.1 Espectrofotómetro de absorción atómica.
47.2.2 Lámpara de plomo.
47.2.3 Cápsula de platino de 100 ml de capacidad o similar.
47.2.4 Baño de arena.
47.2.5 Mufla con circulación de aire.
47.2.6 Matraces de 10, 100 y 1.000 ml de capacidad.
47.3 Reactivos.
47.3.1 Ácido sulfúrico del 96 por 100 (d = 1,835).
47.3.2 Ácido nítrico del 70 por 100 (d = 1,413).
47.3.3 Ácido nítrico al 1 por 100 en agua destilada (v/v).
47.3.4 Solución patrón de 1.000 ppm de plomo. Disolver 1,598 gramos de (NO3)2Pb enrasando a 1.000 ml con ácido nítrico al 1 por 100.
47.4 Procedimiento.
47.4.1 Preparación de la muestra.‒Poner 100 ml de la muestra en una cápsula de platino y llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena. Añadir a continuación 2 ml de ácido sulfúrico y carbonizar el residuo en el baño de arena. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450 °C; transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de ácido nítrico concentrado, evaporar en el baño de arena e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de ácido nítrico concentrado y 2 ml de agua destilada, una vez disueltas filtrar y recoger el filtrado en un matraz de 10 ml, lavando la cápsula y el filtro con agua destilada hasta el enrase.
47.4.2 Construcción de la curva patrón.‒A partir de la solución patrón 46.3.4, tomar alícuotas de 0,2; 0,4; 0,6; 0,8, y 1 ml, y llevar a 100 ml con ácido nítrico al 1 por 100 (v/v).
El contenido en plomo de estas soluciones es, respectivamente, 2, 4, 6, 8 y 10 p.p.m. Anotar las absorbancias obtenidas frente a las concentraciones correspondientes.
47.4.3 Determinación.‒Efectuar la lectura directa de la muestra preparada según 47.4.1 a 283,3 nm.
47.5 Cálculos.
Calcular el contenido en plomo, expresado en p.p.m. mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta e1 factor de dilución.
39(b). FLÚOR
39(b).1 Principio.
Determinación directa del flúor total por potenciometría utilizando un electrodo iónico específico.
Para eliminar las posibles causas de error se le adiciona al vino una solución tampón.
39(b).2 Material y aparatos.
39(b).2.1 pH-metro con escala que permita apreciar 0,1 mV.
39(b).2.2 Electrodo selectivo de flúor.
39(b).2.3 Electrodo de referencia de calomelanos.
39(b).2.4 Microbureta graduada en 1/100 de ml.
39(b).2.5 Recipientes de plástico de 50-100 ml de capacidad para mezclas y matraces en material de plástico para conservar las soluciones patrón.
39(b).2.6 Pipetas de precisión graduadas en microlitros.
39(b).2.7 Agitador magnético.
39(b).3 Reactivos.
39(b).3.1 Solución patrón de fluoruros 10‒2 M conteniendo 190 mg de F‒por litro. Pesar 0,4198 g de FNa (desecado durante cuatro horas a 106 °C antes de su utilización), disolver y enrasar a un volumen de 1.000 mL
39(b).3.2 Solución tampón de PO4H3 0,75 M.
39(b).4 Procedimiento.
39(b).4.1 Verificación del electrodo y determinación de su pendiente.
A partir de la solución 3.1 preparar, mediante diluciones, soluciones de concentraciones conocidas de 10‒3 M, 10‒4 M y 10‒5 M, que contienen, respectivamente, 19, 1,9 y 0,19 mg de F‒, por litro.
Tomar dos vasos de precipitados; en uno de ellos colocar 25 ml de la disolución 10‒3 M de F‒, adicionar 5 ml de solución tampón de PO4H3 y determinar su potencial agitando de forma moderada mientras dure la medida. En el otro vaso, poner 25 ml de disolución 10‒4 M de F‒, 5 ml de solución tampón de PO4H3 y determinar su potencial, agitando como anteriormente. La diferencia entre los dos potenciales es la pendiente del electrodo (S) y cuyo valor debe ser, aproximadamente, 59 mV.
39(b).4.2 Determinación.
Tomar 25 ml de vino, adicionar 5 ml de la solución tampón y determinar su potencial (E1). A continuación, y en el mismo vaso, adicionar un ml de disolución 10‒3 M de F‒ y determinar su potencial (E2).
Si el salto de potencial es pequeño, indica que la concentración de F‒ es muy alta y hay que diluir la muestra hasta que el salto alcanzado esté comprendido alrededor de 20-40 mV.
Los volúmenes de muestra y solución tampón pueden ser modificados en función de la forma y disposición de los electrodos utilizados.
39(b).5 Cálculos.
La cantidad de flúor, expresada en mg/l, nos viene determinada por la fórmula:
Siendo:
CF‒ = concentración, en mg/l, de F‒ en el medio.
V = volumen, en ml, de solución patrón de fluoruro añadida.
C = concentración, en mg/l, de la solución patrón adicionada.
S = pendiente del electrodo.
ΔE = diferencia de los potenciales E1 y E2 obtenidos en 39(b).4.2.
Este valor se deberá multiplicar por el factor de dilución correspondiente, en caso de haber sido necesario efectuarla.
39(b).6 Observaciones.
39(b).6.1 Todas las soluciones deben conservar una temperatura próxima a 25 °C ± 1 °C durante la medida.
39(b).7 Referencias.
1. H. E. Haller y C. H. Junge, 1974, O. I. V. 317/FV/518 y 133/FV/439.
2. Deschreider, A., y Mme. R. Meaux, 1974. Determination des flúor dans les vins et eaux minerales naturelles au moyen d’une electrode ionique specifique.
48. RELACIÓN P/α
48.1 Principio.
Estimación de los contenidos relativos de glucosa y fructosa, en mostos, vinos dulces y mistelas, mediante el establecimiento de la relación entre azúcares reductores y desviación polarimétrica a 20 °C.
48.2 Material y aparatos.
48.2.1 Como en 7(a).2; 7(b).2 o 7(c).2.
48.2.2 Polarímetro con luz monocromática amarilla (lámpara vapor de sodio) y tubo de 20 cm.
48.3 Procedimiento.
48.3.1 Determinar el contenido en azúcares reductores según el método 7(a), 7(b) o 7(c).
48.3.2 Medida de la desviación polarimétrica.
Una vez verificado el correcto reglaje del polarímetro, comprobando la correspondencia del valor «cero» con la existencia de un campo luminoso uniforme, ajustándolo si es necesario, introducir en el tubo del polarímetro el líquido de defecación sin diluir, incoloro y limpio, utilizando para la determinación de azúcares reductores, evitando la formación de burbujas de aire. Anotar la temperatura del líquido que debe ser lo más próxima posible a 20°C.
Efectuar la lectura de la desviación polarimétrica varias veces sucesivas, tomando la media de los resultados obtenidos.
48.4 Cálculos.
Determinar el poder rotatorio y la relación P/oc aplicando las fórmulas siguientes:
OC20 = oct + oct (t ‒ 20) x K
P/OC20 (expresado con su correspondiente signo)
Siendo:
P = g/l de azúcares reductores.
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